Biochemical and molecular study of members of euphorbiaceae family for tyrosinase inhibitory effect - Ekapot Singsuksawat (Chulalongkorn University, 2004)
การสร้างเม็ดสีเมลานิน (Melanin) โดยเซลล์เมลาโนไซด์ (melanocyte cells) ในกระบวนการเมลาโนจีเนซิส (Melanogenesis) จะมีการกระตุ้นของเอนไซม์ไทโรซิเนส (Tyrosinase) และโปรตีนที่เกี่ยวข้องกับเอนไซม์ชนิดนี้ (Tyrosinase-related protein) โดยมีเอนไซม์ไทโรซิเนสเป็นตัวควบคุมอัตราการสร้างเม็ดสีที่เกิดจากการกระตุ้นของสารหลายชนิดรวมถึงแสงจากดวงอาทิตย์ให้เพิ่มการสร้างเมลานินมากขึ้น การสร้างเม็ดสีที่มากเกินความจำเป็นนำไปสู่การเกิดฝ้า (melasma) ซึ่งสามารถรักษาโดยทำให้จางลงด้วยผลิตภัณฑ์ที่มีส่วนผสมของสารไฮโดรควินโนน (Hydroquinone) แต่มักมีผลข้างเคียงในการรักษา เช่น ทำให้เกิดการระคายเคืองและอาการไหม้ของผิวหนัง ก่อนหน้านี้ได้มีรายงานว่าสารสกัดจากพืชจากตระกูลยูโฟรเบีย (Euphorbiaceae) สามารถใช้ในการรักษาฝ้าได้ดังนั้นในการศึกษานี้จึงมีวัตถุประสงค์เพื่อทำการทดสอบคุณสมบัติของสารสกัดจากพืชในตระกูลนี้ 2 ชนิดที่พบมากในประเทศไทย ได้แก่ ตะเข้คุมวัง (Mallotus spodocarpus) และ กระบือเจ็ดตัว (Excoecaria bicolar) ในการยับยั้งการทำงานของเอนไซม์ไทโรซิเนสโดยการทดสอบปฏิกริยาทางชีวเคมีของสารสกัดที่มีผลต่อเอนไซม์ไทโรซิเนสที่สกัดมาจากเห็ด ผลการศึกษาพบว่าสารสกัดกระบือเจ็ดตัวออกฤทธิ์ในการยับยั้งไทโรซิเนสที่สกัดจากเห็ด ได้ดีกว่าสารสกัดตะเข้คุมวังโดยผลการยับยั้งจะเพิ่มขึ้นตามความเข้มข้นที่เพิ่มขึ้นจาก 0.125 มก./มล. ถึง 2 มก./มล. จากการทดสอบความเป็นพิษของสารสกัดทั้งสองชนิดในเซลล์เมลาโนไซด์โดยวิธี MTT พบว่าสารสกัดตะเข้คุมวังมีความเป็นพิษสูงมากกว่า สารสกัดจากกระบือเจ็ดตัว ซึ่งมีความเป็นพิษประมาณ 13% ที่ความเข้มข้น 0.125 มก./มล. อย่างไรก็ตามพบว่าสารสกัดทั้งสองชนิดมีผลลดการแสดงออกของ RNA ของไทโรซิเนสและ MITF ซึ่งเป็นโปรตีนที่ควบคุมการแสดงออกของไทโรซิเนสในระดับความเข้มข้น 10 ไมโครกรัม/มล. และ 100 ไมโครกรัม/มล. ตามลำดับ ในการทดลองขั้นต่อไปได้นำสารสกัดจากกระบือเจ็ดตัวที่ให้ผลในการยับยั้งการทำงานของไทโรซิเนสและมีความเป็นพิษต่อเซลล์น้อยกว่า นำมาทดสอบการแสดงออกของโมเลกุลที่เกี่ยวข้องในการควบคุมปริมาณของไทโรซิเนสผ่านทาง MITF โดยวิธี Western blot ผลการศึกษาพบว่าสารสกัดจากกระบือเจ็ดตัวเพิ่มระดับโปรตีนของ Phosphorylated form of ERK ซึ่งเป็นตัวควบคุมหลักในกระบวนการเสื่อมสลายของ MITF ในระดับความเข้มข้น 10 ไมโครกรัม/มล. และ 100 ไมโครกรัม/มล. ตามลำดับ จากข้อมูลข้างต้นสรุปได้ว่าสารสกัดจากกระบือเจ็ดตัวให้ผลในการยับยั้งการทำงานของเอนไซม์ไทโรซิเนสโดยเกี่ยวข้องกับโมเลกุล ERK ในกระบวนการเมลาโนจีเนซิสนำไปสู่การเสื่อมสลายของโปรตีน และ RNA ของ MITF และอาจจะเป็นประโยชน์ในการรักษาฝ้า