Development of paper-based devices for detection of Vibrio parahaemolyticus DNA from loop-mediated isothermal amplification - Jutaporn Tipchote (Chulalongkorn University, 2016)
Vibrio parahaemolyticus (V. parahaemolyticus) เป็นแบคทีเรียแกรมลบ ลักษณะรูปร่างเป็นแท่ง สามารถเจริญเติบโตได้ในสภาวะที่เป็นเกลือ เป็นเชื้อที่พบได้ในอาหารทะเล หากบริโภคอาหารทะเลดิบหรือปรุงไม่สุก และมีการปนเปื้อนของ V. parahaemolyticus จะทำให้เกิดโรคในทางเดินอาหาร เช่น ลำไส้อักเสบ ท้องเสีย เป็นต้น งานวิจัยนี้ได้ใช้เทคนิคการตรวจวัดด้วยสีบนอุปกรณ์ฐานกระดาษในการตรวจวัดดีเอ็นเอของ V. parahaemolyticus ที่เพิ่มปริมาณดีเอ็นเอโดยเทคนิคลูปเมดิเอทเตดไอโซเทอร์มอลแอมพลิฟิเคชั่น การเพิ่มปริมาณดีเอ็นเอของ V. parahaemolyticus ด้วยเทคนิคลูปเมดิเอทเตดไอโซเทอร์มอลแอมพลิฟิเคชั่น มีการใช้ไพรเมอร์ 6 ชุด ที่จำเพาะต่อดีเอ็นเอของ V. parahaemolyticus เพิ่มปริมาณดีเอ็นเอโดยใช้อุณหภูมิ 65 องศาเซลเซียส ใช้เวลา 45 นาที จากนั้นตรวจวัดดีเอ็นเอของ V. parahaemolyticus ที่เพิ่มปริมาณขึ้น โดยเทคนิคการตรวจวัดด้วยสีด้วยอนุภาคเงินขนาดนาโน (สีเหลือง) บนอุปกรณ์ฐานกระดาษ พบว่า เมื่อมีดีเอ็นเอ สีของอนุภาคเงินขนาดนาโนไม่เกิดการเปลี่ยนแปลงสี แต่เมื่อไม่มีดีเอ็นเอ สีของอนุภาคเงินขนาดนาโนเปลี่ยนจากสีเหลืองไปเป็นสีแดง ซึ่งผลการทดลองสามารถตรวจสอบได้ด้วยตาเปล่า ขีดจำกัดของการตรวจวัดด้วยเทคนิคการตรวจวัดด้วยสีบนอุปกรณ์ฐานกระดาษอยู่ที่ 11.15 จำนวนโคโลนีต่อมิลลิลิตร เทคนิคการตรวจวัดด้วยสีบนอุปกรณ์ฐานกระดาษสามารถตรวจวัด V. parahaemolyticus ในตัวอย่างอาหารทะเล (กุ้ง หอยนางรม) ได้ เมื่อเปรียบเทียบผลการตรวจวัด V. parahaemolyticus โดยเทคนิคการตรวจวัดด้วยสีบนอุปกรณ์ฐานกระดาษ กับเทคนิคการเลี้ยงเชื้อ V. parahaemolyticus บนอาหารเลี้ยงเชื้อ และเทคนิคเจลอิเล็คโตรโฟเรซิส ซึ่งเป็นวิธีมาตรฐาน ให้ผลที่ถูกต้องสอดคล้องกัน  ดังนั้นเทคนิคการตรวจวัดด้วยสีบนอุปกรณ์ฐานกระดาษเป็นเทคนิคการตรวจวัดที่รวดเร็ว สามารถทำได้ง่าย ตรวจวัดได้รวดเร็ว และเป็นเทคนิคที่มีราคาถูกสำหรับการตรวจวัด V. parahaemolyticus