INTERACTION OF ANTI-LIPOPOLYSACCHARIDE FACTOR ISOFORM 3 FROM BLACK TIGER SHRIMP Penaeus monodon WITH WHITE SPOT SYNDROME VIRUS PROTEINS - Thanachai Methatham (Chulalongkorn University, 2013)
เพปไทด์ต้านจุลชีพมีบทบาทสำคัญในการต่อสู้เชื้อจากจุลชีพ แอนติลิโพพอลิแซกคาไรด์แฟกเตอร์ไอโซฟอร์ม 3 (ALFPm3) เพปไทด์ต้านจุลชีพที่ถูกค้นพบในกุ้งกุลาดำ Penaeus monodon เป็นเพียงชนิดเดียวเท่านั้นที่สามารถต่อต้านเชื้อไวรัสตัวแดงดวงขาว (WSSV) ได้ อย่างไรก็ตามกลไกที่เกี่ยวข้องกับการต่อต้านเชื้อไวรัสของ ALFPm3 ยังไม่ทราบอย่างแน่ชัด ดังนั้นเพื่อให้เกิดความเข้าใจเกี่ยวกับการตอบสนองต่อเชื้อไวรัสตัวแดงดวงขาวของโปรตีน ALFPm3 ในงานวิจัยก่อนหน้านี้ได้ใช้เทคนิค Yeast two-hybrid assay ในการจำแนกโปรตีนของเชื้อไวรัสตัวแดงดวงขาว ได้แก่ โปรตีน WSSV186 WSSV189 WSSV395 WSSV458 และ WSSV471 ที่สามารถเกิดปฏิสัมพันธ์กับโปรตีน ALFPm3 ได้ และยืนยันการเกิดปฏิสัมพันธ์ระหว่างโปรตีนรีคอมบิแนนท์ ALFPm3 (rALFPm3) กับโปรตีนรีคอมบิแนนท์ WSSV189 (rWSSV189) และ WSSV471 (rWSSV471) ด้วยเทคนิค in vitro pull-down แล้วและในการศึกษานี้ได้ยืนยันปฏิสัมพันธ์ระหว่างโปรตีน rALFPm3 กับโปรตีนรีคอมบิแนนท์ WSSV458 (rWSSV458) ด้วยเทคนิค in vitro pull-down เช่นเดียวกันและเมื่อบ่มโปรตีนรีคอมบิแนนท์ของไวรัส (rWSSV189, rWSSV458, rWSSV471) กับโปรตีน rALFPm3 พบว่าการจับของโปรตีนรีคอมบิแนนท์ของไวรัสไปรบกวนแอคติวิตีในการต่อต้านเชื้อไวรัสตัวแดงดวงขาวของโปรตีน rALFPm3 ซึ่งดูได้จากเปอร์เซ็นต์การรอดชีวิตของกุ้งกุลาดำกลุ่มที่ถูกฉีดด้วยเชื้อไวรัสตัวแดงดวงขาวที่บ่มกับโปรตีน rALFPm3 ซึ่งผสมกับโปรตีนรีคอมบิแนนท์ WSSV แต่ละตัวที่ลดลงเมื่อเปรียบเทียบกับกุ้งกลุ่มที่ถูกฉีดด้วยเชื้อไวรัสตัวแดงดวงขาวที่บ่มกับโปรตีน rALFPm3 เพียงอย่างเดียว อย่างไรก็ตามข้อมูลของโปรตีน WSSV189, WSSV458 และ WSSV471 ยังมีจำกัด ในที่นี้จึงศึกษาการแสดงออกของโปรตีน WSSV189, WSSV458 และ WSSV471 ในเหงือกและในเม็ดเลือดของกุ้งที่ติดเชื้อไวรัสตัวแดงดวงขาว ซึ่งพบว่ามีการแสดงออกของโปรตีนไวรัสทุกตัวเพิ่มขึ้นเมื่อติดเชื้อไวรัสตัวแดงดวงขาว ก่อนหน้านี้มีรายงานว่าโปรตีน WSSV458 เป็นโปรตีนโครงสร้างในส่วน tegument ของเชื้อไวรัสตัวแดงดวงขาว ในการศึกษานี้ใช้เทคนิค Western blot ศึกษาหาตำแหน่งของโปรตีน WSSV189 และ WSSV471 บนเชื้อไวรัสตัวแดงดวงขาวและบนโปรตีนของเชื้อไวรัสตัวแดงดวงขาวส่วน envelope และส่วน nucleocapsid โดยผลการทดลองแสดงว่าโปรตีนของไวรัสทั้งสองชนิดนี้อยู่ในส่วนของ envelope และเทคนิค Immunoelectron microscopy ซึ่งใช้แอนติบอดีที่จำเพาะต่อ WSSV189 และ WSSV471 ยืนยันตำแหน่งโปรตีนของไวรัสทั้งสองชนิดในส่วน envelope ของเชื้อไวรัสตัวแดงดวงขาว จากผลการทดลองแสดงว่ากลไกในการต่อต้านเชื้อไวรัสตัวแดงดวงขาวของโปรตีน ALFPm3 เกี่ยวข้องกับการจับกับโปรตีนโครงสร้างของเชื้อไวรัสตัวแดงดวงขาว ได้แก่ WSSV189, WSSV458, WSSV471 และอาจจะรวมถึงโปรตีนของไวรัสชนิดอื่นๆ