Angiotensin I-converting enzyme inhibitory activity of proteins hydrolysate from seeds Thai fruits - Atthasith Nuchprapha (Chulalongkorn University, 2013)
ระบบเรนิน-แอนจิโอเทนซินเป็นระบบหนึ่งในร่างกายที่มีผลเกี่ยวกับการควบคุมความดันโลหิต โดยเรนินจะส่งผลให้แอนจิโอแทนซิโนเจนปลดปล่อยแอนจิโอเทนซิน I และจะถูกเปลี่ยนไปเป็นแอนจิโอเทนซิน II ด้วยแอนจิโอเทนซินคอนเวอร์ติงเอนไซม์ หรือ ACE โดยเอนไซม์ชนิดนี้มีบทบาทต่อพยาธิสภาพของร่างกายในการควบคุมความดันโลหิตด้วยสองปฏิกิริยาที่เกี่ยวเนื่องกัน โดยจะไปเปลี่ยนแอนจิโอเทนซิน I ไปเป็นแอนจิโอเทนซิน II ซึ่งจะมีความสามารถสูงในการทำให้หลอดเลือดหดตัว และยังไปยับยั้งการทำงานของแบรดดีไคนินที่มีผลในการขยายของหลอดเลือด โปรตีนสกัดหยาบและโปรตีนไฮโดรไลเสตที่เตรียมโดยการนำไปบ่มกับเอนไซม์เพปซินและแพนคริเอตินจากเมล็ดผลไม้ไทย 4 ชนิด ได้แก่ เมล็ดมะละกอดิบ, เมล็ดมะละกอสุก, เมล็ดเงาะ, เมล็ดลำไย, และเมล็ดลิ้นจี่ได้ถูกนำมาทดสอบหาความสามารถในการยับยั้งกิจกรรมของเอนจิโอเทนซิน I-คอนเวอร์ติงเอนไซม์ในขั้นของหลอดทดลอง พบว่าโปรตีนไฮโดรไลเสตที่เตรียมจากเมล็ดลิ้นจี่มีความสามารถในการยับยั้งมากที่สุด โดยมีค่า IC50 ที่ 0.22±0.010 มิลลิกรัมโปรตีนต่อมิลลิลิตร เมื่อนำโปรตีนไฮโดรไลเสตของเมล็ดมะละกอดิบ, เมล็ดลำไย, และเมล็ดลิ้นจี่ไปทำการศึกษาจลนพลศาสตร์พบว่ามีการยับยั้งแบบไม่แข่งขัน และมีค่า Ki เท่ากับ 6.02, 2.82, และ5.62 มิลลิกรัมโปรตีนต่อมิลลิลิตร และยังพบว่าตัวยับยั้งทั้ง 3 ชนิดนี้ทำงานได้ดีในช่วงค่าความเป็นกรด-ด่างที่ 6 – 8 โดยที่จะทนต่ออุณหภูมิได้ตั้งแต่ -20 จนถึง 80 องศาเซลเซียส หลังจากนำโปรตีนไฮโดรไลเสตทั้ง 3 ชนิดไปทำบริสุทธิ์บางส่วนด้วยเทคนิคอัลตราฟิลเตรชันด้วยเยื่อกรองขนาด 10 กิโลดาลตันและ 5 กิโลดาลตัน พบว่าส่วนที่มีขนาดต่ำกว่า 5 กิโลดาลตันของเมล็ดลำไยมีความสามารถในการยับยั้ง ACE ได้ดีที่สุด โดยมีค่า IC50 อยู่ที่ 0.43±0.011 มิลลิกรัมโปรตีนต่อมิลลิลิตร จึงนำโปรตีนส่วนนี้ไปแยกเป็นเพปไทด์ด้วยเครื่องเอชพิแอลซีแบบรีเวิร์สเฟส พบว่าแยกได้เพปไทด์จำนวน 5 พีค จึงนำไปทำการวิเคราะห์หาลำดับของกรดอะมิโนด้วยเทคนิคแมสสเปกโตรเมตตรี พบว่าได้ลำดับกรดอะมิโน 9 สายและพบว่ามี 3 สายที่อาจจะมีผลในการยับยั้งกิจกรรมของ ACE ได้