Characterization of a novel protein containing TBC1 domain in the black tiger shrimp Penaeus monodon and its role in reponse to white spot syndrome virus infection - Wanchart Yingvilasprasert (Chulalongkorn University, 2011)
โปรตีนโดเมน TBC (TRE2/BUB2/CDC16) เป็นโปรตีนขนาดประมาณ 200 กรดอะมิโนซึ่งพบในกลุ่มโปรตีนที่กระตุ้นการทำงานของ Rab GTPase ในการขนส่งสารถุงหุ้มภายในเซลล์ จากฐานข้อมูล EST และผลการวิเคราะห์ทาง microarray ของกุ้งกุลาดำ พบยีนชนิดใหม่ คือ PmTBC1D20 ซึ่งมีความคล้ายคลึงกับโปรตีน TBC1D20 ในสิ่งมีชีวิตหลายชนิด และยีนดังกล่าวมีการตอบสนองต่อการติดเชื้อไวรัสตัวแดงดวงขาว ในการศึกษาครั้งนี้ ได้ทำการหาลำดับนิวคลีโอไทด์ที่ครบสมบูรณ์ของยีน โดยมีขนาดทั้งหมด 2004 คู่เบส สามารถแปลเป็นโปรตีนที่มีลำดับกรดอะมิโน 480 ตัว เมื่อศึกษาการแสดงออกของยีนนี้ในอวัยวะต่างๆของกุ้งกุลาดำด้วยเทคนิค semi-quantitative RT-PCR พบว่า ยีนนี้มีการแสดงออกในทุกอวัยวะรวมทั้งเม็ดเลือด และพบการแสดงออกของยีนนี้เพิ่มขึ้นในเม็ดเลือดกุ้งประมาณ 2.3 และ 2.0 เท่าหลังจากกุ้งติดเชื้อไวรัสตัวแดงดวงขาวที่ 24 และ 48 ชั่วโมงตามลำดับหลังการติดเชื้อ โดยใช้เทคนิค quantitative real-time RT-PCR สำหรับการศึกษาผลของการยับยั้งยีน PmTBC1D20 ด้วยเทคนิค RNA interference ต่อการติดเชื้อไวรัสตัวแดงดวงขาว พบว่า ในเซลล์เม็ดเลือดปฐมภูมิของกุ้งกุลาดำที่ยับยั้งยีนนี้แล้วทำให้ติดเชื้อไวรัสดังกล่าวปริมาณยีน VP28 ซึ่งเป็นโปรตีนเปลือกหุ้มของไวรัสตัวแดงดวงขาวลดลง ประมาณ 50% และพบกุ้งที่ถูกยับยั้งการแสดงออกของยีนนี้แล้วทำให้ติดเชื้อไวรัสตัวแดงดวงขาวมีการแสดงออกของยีน VP28, ie1 และ WSV477 ลดลงมากกว่า 90% เมื่อพิจารณาเซลล์เม็ดเลือดกุ้งภายใต้กล้องจุลทรรศน์ด้วยเทคนิค immunofluorescense hybridization โดยใช้แอนติบอดี้ที่จำเพาะกับโปรตีน PmTBC1D20 พบโปรตีนนี้แสดงออกในเม็ดเลือดทุกชนิด โดยพบอยู่ในไซโตพลาสซึมและเยื่อหุ้มนิวเคลียส และมีปริมาณโปรตีนนี้เพิ่มมากขึ้นเมื่อกุ้งติดเชื้อไวรัสตัวแดงดวงขาว นอกจากนี้เมื่อใช้เทคนิคนี้ศึกษาผลของการยับยั้งการแสดงออกของยีน PmTBC1D20 ในกุ้งแล้วทำให้ติดเชื้อไวรัสตัวแดงดวงขาว พบปริมาณของโปรตีน VP28 ในเซลล์เม็ดเลือดกุ้งน้อยกว่าในกุ้งกลุ่มควบคุม จากผลการทดลองทั้งหมด แสดงให้เห็นว่า PmTBC1D20 น่าจะเกี่ยวข้องกับการติดเชื้อไวรัสตัวแดงดวงขาวในกุ้งกุลาดำ