Angiotensin I-converting enzyme inhibitory activity of purified proteins and peptides from the rhizomes of zingiberaceae plants - Maneerat Yodjun (Chulalongkorn University, 2010)
แอนจิโอเทนซินI-คอนเวอร์ติง เอนไซม์ มีความสำคัญเกี่ยวข้องข้องกับภาวะความดันโลหิตสูงซึ่งมีฤทธิ์ทำให้เกิดการเปลี่ยน แอนจิโอเทนซิน I ไปเป็นแอนจิโอเทนซิน II ซึ่งมีผลต่อการลดความดันโลหิตได้ ในงานวิจัยนี้โปรตีนของพืชวงศ์ขิงที่บริสุทธิ์และโปรตีนที่ถูกย่อยด้วยเปปซิน และนำมาตรวจสอบฤทธิ์การยับยั้งแอนจิโอเทนซินI-คอนเวอร์ติง เอนไซม์ โปรตีนสกัดหยาบจากเหง้าของพืชวงศ์ขิง 15 ชนิด นำมาตรวจสอบฤทธิ์การยับยั้งของแอนจิโอเทนซินI-คอนเวอร์ติงเอนไซม์ โดยการหาฤทธิ์การยับยั้งของโปรตีนซึ่งเป็นการศึกษาในขั้นหลอดทดลอง โปรตีนสกัดหยาบจากเหง้าของไพลดำมีฤทธิ์การยับยั้งของแอนจิโอเทนซินI-คอนเวอร์ติงเอนไซม์สูงสุดมีค่าเท่ากับ7.30×10-7 มิลลิกรัมโปรตีนต่อมิลลิลิตรจากนั้นนำโปรตีนมาทำให้บริสุทธิ์โดยเทคนิคโครมาโทกราฟีแบบแลกเปลี่ยนไอออนด้วยคอลัมน์ SP sepharose โดยชะแบบเป็นลำดับขั้น สามารถแยกโปรตีนสกัดหยาบได้เป็น 5 ส่วน คือ unbound F25 F50 F75 และ F100 ตามลำดับ โดยส่วน F75 มีปริมาณโปรตีนสูงที่สุด เมื่อใช้เทคนิคพอลิอะคริลาไมด์เจลอิเล็กโตรฟอเรซิสแบบเสียสภาพ พบว่าส่วนของ F75 มีโปรตีนบริสุทธิ์อย่างน้อย 1 ชนิดที่มีขนาด 20.7 กิโลดาลตัน เมื่อวิเคราะห์ลำดับกรดอะมิโนภายในโมเลกุลโดยการตัดด้วยทริปซิน แล้ววิเคราะห์ชิ้นส่วนที่ถูกย่อยด้วยเครื่อง LC-MS/MS พบว่าลำดับอะมิโนของไพลดำมีความคล้ายคลึงกับกลุ่มไคติเนส ทำการศึกษาฤทธิ์ของสารยับยั้งแอนจิโอเทนซินI-คอนเวอร์ติงเอนไซม์ของ F75 มีเสถียรภาพที่อุณหภูมิ -20 จนถึง 60 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 30 นาทีและที่ค่าความเป็นกรด-ด่าง ซึ่งมีค่าลดลงในช่วงพีเอช 6 และเพิ่มขึ้นสูงช่วง 8-12 และนำโปรตีนมาศึกษาทางจลนพลศาสตร์พบว่ามีค่า Ki เท่ากับ 9.1 × 10-5 มิลลิกรัมโปรตีนต่อมิลลิลิตร ในส่วนของเพปไทด์พบว่าโปรตีนจากเหง้าของไพลเหลืองที่ทำการย่อยด้วยเปปซินที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 30 นาที สามารถหาฤทธิ์ของสารยับยั้งเอนไซม์แอนจิโอเทนซินI-คอนเวอร์ติงเอนไซม์ ได้ค่า IC50 เท่ากับ 0.38±0.012 มิลลิกรัมโปรตีนต่อมิลลิลิตร หลังจากนั้นนำโปรตีนจากเหง้าของไพลเหลืองที่ทำการย่อยด้วยเปปซินมาแยกเพปไทด์โดย เครื่องเอชพีแอลซีแบบ รีเวอร์เฟส พบว่าได้เพปไทด์มีลักษณะเป็นพีคเดียว และนำมาตรวจสอบฤทธิ์ของสารยับยั้งแอนจิโอเทนซินI-คอนเวอร์ติงเอนไซม์ ได้ค่า IC50 เท่ากับ 0.011±0.012 มิลลิกรัมโปรตีนต่อมิลลิลิตร เมื่อศึกษาทางจลศาสตร์พบว่าเพปไทด์มีค่า Ki เท่ากับ 1.25 × 10-6 มิลลิกรัมโปรตีนต่อมิลลิลิตรและเพปไทด์ของสารยับยั้งแอนจิโอเทนซินI-คอนเวอร์ติงเอนไซม์ มีการยับยั้งแบบแข่งขัน โดยลำดับกรดอะมิโนของเพปไทด์ไพลเหลืองที่พบคือ โปรลีน-อะลานีน-กลูตามิก-ไกลซีน-ฮิสติดีน-เซอรีน ซึ่งมีความคล้ายคลึงกับลำดับกรดอะมิโนของโปรตีนไมโทคอนเดรียจากมันฝรั่ง