Identification of genes involved in osmoregulation of the black tiger shrimp Penaeus monodon - Suchonma Udomlertpreecha (Chulalongkorn University, 2006)
งานวิจัยนี้ใช้เทคนิค Differential Display PCR (DD-PCR) ในการระบุยีนที่เกี่ยวข้องกับการควบคุมออสโมลาริตีในต่อมแอนเทนนอล, เอพิโพไดท์ และเหงือก ของกุ้งกุลาดำที่ได้รับความเครียดจากความเค็มของน้ำ โดยนำคู่ไพรเมอรื oligo-dT และ arbitary จำนวน 26 คู่ มาทำการตรวจสอบหายืนที่มีการแสดงออกแตกต่างกันระหว่างกุ้งกลุ่มควบคุมคือ สุ้งที่เลี้ยงที่ระดับความเค็ม 25 ส่วนในพัน และกุ้งกลุ่มที่ได้รับความเครียดคือ กุ้งที่เลี้ยงในระดับความเค็มที่ 3 และ 40 ส่วนในพัน เป็นระยะเวลา 6, 24 ชั่วโมง และ 2 สัปดาห์ พบแถบ cDNA ที่มีการแสดงออกแตกต่างกันทั้งหมด 97 แถบ ซึ่งมาจากไพรเมอร์ 17 คู่ นำแถบ cDND เหล่านี้มาเพิ่มปริมาณด้วยเทคนิคพีซีอาร์ แล้วทำการโคลน cDNA ที่ได้เข้าสู่เวกเตอร์ ทำการสุ่งเลือกโคลนและนำไปหาลำดับเบสบางส่วน จากการวิเคราะห์ลำดับเบสของโคลนที่ได้พบว่า มี 129 แถบที่มีลำดับเบสไม่เหมือนกัน เมื่อนำลำดับเบสไปเปรียบเทียบกับข้อมูลใน GenBank พบว่า มี 37 แถบที่มีลำดับเบสคล้ายกับยีนที่มีรายงานแล้ว โดย 22 แถบมีความคล้ายกับยีนที่ทราบหน้าที่, 6 แถบมีความคล้ายกับ ribosomal protein และ 9 แถบมีความคล้ายกับ hypothetical protein โดยในการศึกษานี้ได้ทำการคัดเลือกยีนที่น่าสนใจได้แก่ carbonic anhydrase, corin isoform 2, sarcolemmal associated protein 2, NIMA-family kinase Nek 7, karyopherina alpha 4, vacuolar protein sorting 18, CHK1 checkpoint, Rps 16 protein, integrin alpha,มี 5 ยีนที่มีความคล้ายกับ hypothetical proteins และ 9 ยีนซึ่งเป็นยีนที่ไม่ทราบหน้าที่ ทำการยืนยันการแสดงออกของยีนดังกล่าวด้วยเทคนิค semi-quantitative RT-PCR ซึ่งพบว่า มี 21 แถบ cDNA ที่มีการแสดงออกตอบสนองต่อการเปลี่ยนแปลงความเค็มของน้ำ ลำดับกรดอะมิโนของแถบ cDNA จำนวน 8 แถบ ที่เป็นยีนที่ไม่ทราบหน้าที่และตอบสนองต่อการเปลี่ยนแปลงระดับความเค็มของน้ำ ได้นำมาทำนายโดเมนโดยใช้โปรแกรม SMART และ Kyte-Doolittle hydropathy plots พบว่า ลำดับกรดอะมิโนของแถบ cDNA S5, S114 และ S126 มีบริเวณทรานสเมมเบรน ยีนที่ตอบสนองต่อการเปลี่ยนแปลง สภาวะความเค็มของน้ำที่ได้จากการศึกษานี้ มีความเป็นไปได้ที่จะเกี่ยวข้องกับระบบการควบคุมออสโมลาริตีในกุ้งกุลาดำ