Screening and indentification of antimicrobial producing actinomycetes from mangrove soil of the inner gulf of Thailand - Sirikan Hunadanamra (Chulalongkorn University, 2006)
ในการศึกษาเพื่อหาสายพันธุ์แอคติโนมัยซีทส์จากดินป่าชายเลนบริเวณอ่าวไทยตอนในของประเทศไทยที่เก็บจากจังหวัดสมุทรปราการ จังหวัดสมุทรสาคร จังหวัดสมุทรสงคราม และจังหวัดเพชรบุรี พบว่าสามารถแยกแบคทีเรียแอคติโนมัยซีทส์ได้จำนวน 50 ไอโซเลต ซึ่งสามารถพิสูจน์เอกลักษณ์แบคทีเรียที่สร้างสปอร์บนเส้นใจอากาศได้เป็นสเตรปโตมัยซีส จำนวน 38 ไอโซเลต และแบคทีเรียที่สร้างสปอร์เดียวบนเส้นใยเป็นไมโครโมโนสบ่อรา จำนวน 12 ไอโซเลตโดยอาศัยผลจากการศึกษาลักษณะทางฟีโนไทป์ จากการคัดกรองฤทธิ์ต้านจุลชีพขั้นต้น พบว่า มีฤทธิ์ยับยั้งแบคทีเรียแกรมบวก Staphylococcus aureus ATCC 6538P, Micrococcus Iuteus ATCC 9341 และ Bacillus subtilis ATCC 6633 จำนวน 28 เชื้อ ยับยั้งแบคทีเรียแกรมลบ Escherichia coli ATCC 25922 และ Pseudomonas aeruginosa ATCC2753 จำนวน 6 เชื้อ และยับยั้งยีสต์ Candida albicans ATCC 10231 จำนวน 5 เชื้อ เลือกตัวแทน 7 เชื้อ ไปศึกษาความคล้ายคลึงทางลำดับเบสในช่วง 16S rDNA พบว่า SAM2-1, B15-4, D10-1, J17-2, J8-1, SMP 3-1 และ D10-5 มีความคล้ายคลึงกับ Streptomyces badius NRRL B-2567T, S. albolongus NBRC13465T, S parvulus NBRC13193T, S. cinnamocastaneus NBRC14278T, S.vayuensis N2T, S. caesius NBRC13376T และ S. caesius NBRC13376T เป็น 98.4%, 98.3%, 94.7%, 93.5%, 98.5%, 97.4% และ 95.9% ตามลำดับ ผลจากค่าความคล้ายคลึงของ 16S rDNA ที่ต่ำกว่า 97.0% จัดได้เป็นสเตรปโตมัยซีสสปีซีส์ใหม่ จากผลการศึกษาลักษณะทางอนุกรมวิธานเคมี พบว่าเชื้อสเตรปโตมัยซีสจะมี L-diaminopimelic ในผนังเซลล์ และเชื้อไมโครโมโนสปอราที่แยกได้มีกรด meso-diaminopimelic ในผนังเซลล์ เชื้อสเตรปโตมัยซีสสายพันธุ์ที่ทดสอบมี menaquinones ชนิด MK-9(H6) และ MK-9(H8) เป็นองค์ประกอบหลัก นอกจากนี้พบว่าปริมาณ G+C ของสาย DNA อยู่ในช่วง 69-74 โมล%นำแอคติโนมัยซีทส์จำนวน 8 สายพันธุ์ที่มีฤทธิ์ต้านจุลซีพดี ได้แก่ SAM2-1, SMP3-1, C10-6, B10-3-2, B10-3-4, C10-2, B10-3-1 และ J15-1 ไปทดสอบคัดกรองขั้นที่สอง และวิเคราะห์ข้อมูลด้วยวิธี NMR spectroscopy นอกจากนี้การศึกษาสารสกัดหยาบด้วยเอทิลอะซิเตตของน้ำหนักปริมาณ 10 ลิตร ของสายพันธุ์ C10-6 ที่คัดเลือกได้ พบว่าสามารถแยกสิ่งสกัดด้วยวิธีการทางโครมาโตกราฟีได้ 10 fraction สารใน fraction ที่ 8 แสดงฤทธิ์ต้านเชื้อจุลินทรีย์ทดสอบทั้งแบคทีเรียแกรมบวก และแบคทีเรียแกรมลบได้มากที่สุด (ความเข้มข้น 1 มิลลิกรัมต่อ 20 ไมโครลิตรต่อดิสก์)