Preparation of N-Acetyl-D-Glucosamine and chitooligosaccharide by enzymatic hydrolysis of chitin and chitosan with serum from para rubber - Akamol Klaikherd (Chulalongkorn University, 2002)
ซีรัมจากยางพารา (Hevea Brasiliensis) เป็นผลพลอยได้จากกระบวนการผลิตน้ำยางข้นซึ่งมีเอนไซม์ที่สามารถย่อยไคทินแบบเอ็นโดไคทิเนสมีชื่อว่า เฮวามีน (hevamine) งานวิจัยนี้เสนอความเป็นไปได้ในการนำเอนไซม์จากซีรัมยางพารามาใช้ผลิตน้ำตาลเอ็น-แอซีทิล-ดี-กลูโคซามีน(GlcNAc) และน้ำตาลเอ็น, เอ็น-ไดแอซิทิลไคโทไบโอส [(GlcNAc)2] จากบีตาไคทีน โดนซีรัมยางพาราที่ใช้ในการทดลองนี้มีปริมาณโปรตีนทั้งหมด 6 mg/mL และมีแอคทิวิตีการย่อยไคทินอยู่ที่ 18 มิลลิยูนิต (mU) ต่อมิลลิกรัมโปรตีน อัตราส่วนที่เหมาะสมระหว่างซีรัมต่อไคทินเป็น 0.22 มิลลิยูนิต/มิลลิกรัม โดยความเข้มข้นของไคทินที่เหมาะสม คือ 60 มิลลิกรัม/มิลลิลิตร ช่วงความเป็นกรดด่างที่เหมาะสมของสารละลายคือ pH 2-4 และเอ็นไซม์ในซีรัมยางพารานี้มีแอคทิวิตีในการย่อยสูงสุดที่อุณหภูมิ 45℃ โดยให้ผลิตภัณฑ์เป็นน้ำตาล GlcNAc และน้ำตาล (GlcNAc)2 ด้วยอัตราส่วนโมลผลิตภัณฑ์ ((GlcNAc)2/GlcNAc) ประมาณ 2:1 และเมื่อย่อยไคทิน 300 มิลลิกรัมจะได้น้ำตาล GlcNAc 39 มิลลิกรัมและน้ำตาล(GlcNAc)2 108 มิลลิกรัม คิดเป็น 11.6 เปอร์เซ็นต์ และ 35.8 เปอร์เซ็นต์ ตามลำดับด้วยการวิเคราะห์ด้วย HPLC ในเวลา 8 วันที่ทำการย่อยด้วยเอนไซม์ 64 มิลลิยูนิต ที่สภาวะเหมาะสม เทคนิคไดอะไลซิสช่วยแยกผลิตภัณฑ์ออกจากไคทินและเอนไซม์ได้ง่ายแต่ประสิทธิภาพของเอนไซม์กลับลดลง น้ำตาล (GlcNAc)2 ถูกทำให้บริสุทธิ์ด้วย gel-filtration chromatography และพบว่าน้ำตาล (GlcNAc)2ได้คืนมา 92 เปอร์เซ็นต์ ด้วยความบริสุทธิ์ 36 เปอรฺเซ็นต์โดยน้ำหนัก เทคนิคการผสมเอนไซม์ได้ถูกใช้สำหรับการผลิต GlcNAc จากไคทิน ซึ่งปฏิกิริยานี้ให้ 52 เปอร์เซ็นต์ของ GlcNAc วิเคราะห์โดย HPLC ในวันที่ 4 และซีรัมให้ผลิตภัณฑ์เป็นไคโทซานนมวลโมเลกุลต่ำ 5.4x104-1.5x105 แทนที่ไคโทโอลิโกแซ็กคาไรด์เมื่อย่อยด้วยไคโทซาน ดังนั้นซีรัมจึงมีศักยภาพที่จะใช้ในการผลิตน้ำตาล GlcNAc และ (GlcNAc)2 และไคโทซานมวลโมเลกุลต่ำ