Optimization of Production and Purification of the NS1 Recombinant Protein from Dengue Virus Type 3 (DENV-3)

• Main Author: Dewi, Rizki
• Format: Final Project
• Language: Indonesia
• Subjects: Kimia
• Online Access: https://digilib.itb.ac.id/gdl/view/32248
• Institution: Institut Teknologi Bandung

Virus dengue merupakan arthropod-borne flavivirus, salah satu penyebab infeksi demam berdarah yang telah menjadi masalah kesehatan di dunia. Protein NS1 virus dengue merupakan antigen potensial dalam pengembangan kit deteksi demam berdarah. Beberapa usaha telah dilakukan untuk memproduksi protein NS1 di Escherichia coli, namun protein NS1 virus dengue sering diekspresikan dalam bentuk badan inklusi (agregat). Pada penelitian ini, kelarutan protein ditingkatkan melalui penerapan ko-ekspresi chaperone dan protein rekombinan NS1 DENV-3 di E. coli BL21 (DE3). E. coli BL21(DE3) yang telah mengandung plasmid pGS-21a dengan gen pengode NS1 dari virus dengue serotipe 3 (DENV-3) ditransformasi dengan plasmid pG-KJE8. Kondisi ekspresi dilakukan dengan variasi konsentrasi L-arabinosa dan tetrasiklin sebagai penginduksi gen chaperone pada plasmid pG-KJE8 dan IPTG sebagai penginduksi gen NS1 DENV-3 pada suhu induksi yang berbeda, dan penggunaan dua jenis media pertumbuhan. Protein NS1 DENV-3 difusikan dengan Glutathione S-transferase menghasilkan protein fusi dengan berat molekul ~66 kDa. Berdasarkan analisis SDS-PAGE, diperoleh kondisi ekspresi optimal pada penggunaan 2 mg/mL L-arabinosa, 10 ng/mL tetrasiklin, dan 0,1 mM IPTG pada suhu induksi 30 ºC dalam media LB, yang diindikasikan dengan adanya peningkatan intensitas pita NS1 DENV-3. Perolehan protein NS1 DENV-3 yang dimurnikan dengan kromatografi afinitas Ni-NTA adalah 4,8 mg/L kultur. Protein rekombinan NS1 DENV-3 dapat dikenali oleh antibodi monoklonal anti NS1 dalam strip imunokromatografis komersial, maka protein rekombinan NS1 DENV-3 ini potensial digunakan dalam pengembangan kit deteksi demam berdarah.