OVERPRODUCTION AND PURIFICATION OF BACTERIOPHAGE VIRUS LIKE PARTICLES (VLPS) AND FERRITIN

• Main Author: Sugito, Timothy
• Format: Final Project
• Language: Indonesia
• Online Access: https://digilib.itb.ac.id/gdl/view/80272
• Institution: Institut Teknologi Bandung

Nanopar+kel protein (PNP) yang mampu terakit sendiri seper+ par+kel mirip virus (Virus Like Par,cle, VLP) berbasis bakteriofaga dan nanopar+kel feri+n polimerik dapat berfungsi sebagai sebuah sistem pembawa yang cocok untuk vaksin karena keunggulannya. VLP memiliki sifat rela+f termostabil dan memiliki imunogenisitas +nggi sehingga mampu menginduksi respons imun lebih +nggi dan +dak infeksius karena +dak adanya materi gene+k virus. Feri+n memiliki stabilitas termal dan pH yang +nggi serta struktur yang unik sehingga memungkinkan dimodifikasi secara internal dan eksternal. Selain itu, kemampuan VLP dan feri+n untuk merakit secara mandiri menjadi nanocages membuat rela+f lebih ekonomis untuk dimanufaktur dibandingkan metode fabrikasi PNP lain. Tujuan percobaan ini adalah untuk memproduksi VLP dan ferri+n dengan protokol yang telah didirikan dan untuk memurnikan mereka serta mengkarakterisasinya. Overproduksi dilakukan dengan IPTG sebagai penginduksi dan berhasil menunjukan hasil yang konsisten dari segi waktu induksi, bobot pelet basah, dan profil protein melalui SDS-PAGE. VLP pada peneli+an ini berasal dari +ga bakteriofaga berbeda yang dinamakan P, Q, dan R. Sementara ferri+n berasal dari +ga bakteri termofilik yang dinamakan X, Y, dan Z. Kondisi purifikasi op+mal untuk VLP didapatkan dengan kromatografi afinitas dengan berbagai konsentrasi imidazol pada dapar penyeimbang, pencuci, dan pengelusi. Protein VLP P dan Q dimurnikan sesuai urutan konsentrasi imidazole pada dapar masing-masing 25 mM; 10 mm; dan 250 mM. Sedangkan protein VLP R adalah imidazol 50 mM; 100mm; dan 2000 mM. Metode untuk mengop+malkan pemurnian feri+n digunakan protein ferri+n Z dengan presipitasi termal pada 80°C dengan kromatografi penukar ion sebagai langkah pemurnian awal diiku+ dengan size-exclusion chromatography sebagai tahap pemolesan. Protein VLP murni yang dikarakterisasi dengan SDS-PAGE memberikan ukuran 29,04 kDa untuk protein P dan Q serta 30,25 kDa untuk protein R. Feri+n Z murni menunjukan spesies dengan puncak sempit dan radius 13,3 nm dengan ukuran sekitar 19 kDa ke+ka dikarakterisasi dengan hamburan cahaya dinamis dan SDS-PAGE.