Isolasi dan Karakterisasi Ekspresi Gen Penyandi Protein Memhran Sporozoite Eimeria tenella Sebagai Dasar Rekombinan untuk Produksi Material Vaksin Subunit Koksidiosis Pada Ayam

• Main Authors: Muchammad Yunus, Pb.D., M.Kes., Drb, Lucia Tri Suwanti, Dr., M.P., drb
• Format: Other NonPeerReviewed
• Language: Indonesian
• Published: UNIVERSITAS AIRLANGGA 2011
• Subjects: QA319-329 Functional Analysis; SF405.5-407 Laboratory animals; SF600-1100 Veterinary medicine
• Online Access: http://repository.unair.ac.id/40968/1/gdlhub-gdl-res-2013-yunusmucha-27687-lp05-12-i.pdf; http://repository.unair.ac.id/40968/; http://lib.unair.ac.id
• Institution: Universitas Airlangga

Salah satu bahan vaksin yang sedang dieksplorasi dan mempunyai prospek yang baik adalah vaksin rekombinan dari protein membran sporozoit Eimeria sp yang dapat dikembangkan, dimanipulasi, diproduksi secara artificial dan massal serta dapat diaplikasikan. Protein membran sporozoit E. tenella diisolasi dan dikarakterisasi ekspresi gen penyandi protein membran sporozoite Eimeria tenella sebagai dasar teknik rekombinan. Sebagai tahap pertama dari penelitian ini melakukan isolasi dan karakterisasi protein membrane sporozoit E. tenella melah.;i teknik ekstraksi protein membrane sporozoit E. tenella dengan metode SDSMPAGE dan Dot Blot. Hasit isolasi protein membran sporozoit diperoleh nilai optical density (OD) protein membrane sporozoit E. tenella dengan teknik indirect ELISA pada konsentrasi suspensi ookista SOO/lll dibandingkan dengan konsentrasi ookista ) 000/1-1] menunjukkan perbedaan yang nyata (P<0,05), dimana konsentrasi protein membrane sporozoit E. tenella dari suspensi ookista lOOO/I.d meningkat ± 46% lebih tinggi dari pada konsentrasi protein membrane sporozoit E. tenella suspensi ookista 500/Jl.1. Pada suspensi hasil elusi protein membrane sporozoit E. tenella diidentifikasi protein membrane sporozoit memperlihatkan adanya beberapa pita dengan variasi beberapa pita sesuai dengan marker yang sudah mempunyai standard berat molekul tertentu. Berdasarkan pengukuran berat molekul dan dikonfirmasikan dengan marker maka semua sarnpel menunjukkan pita yang sarna dengan berat melekul 17 kOa. HasH karakterisasi protein dengan Dot Blot menunjukkan basil uji protein yang temyata spesifik dengan antibodi monoklonal anti protein membran sporozoit E. tenella. Hasil isolasi RNA total dari protein membran sporozoit E. tenella menunjukkan adanya pita rRNA yang terentang di antara marker 23S dan 16S, dengan pita-pita mRNA yang terlihat smear diantara pita-pita rRNA. Berdasarkan gambaran elektroforesis maupun konsentrasinya, maka RNA total hasil ekstrasi dengan Trizol-LS selanjutnya dapat dipakai sebagai template untuk sintesis eDNA. Karakterisasi molekuler dilakukan dengan teknik RT-PCR dan analisis genetik dilakukan terhadap produk PCR. Sekuen nukleotida protein membran sporozoit isolat dibandingkan dengan protein membran sporozoit standart dad Gen Bank dengan GenMac versi 8.0. Serangkaian isolasi eDNA dari total RNA dan mRNA serta hasil analisis sekuen nukleotida protein membran sporozoit menunjukkan panjang fragmen 480 bp. Amplifikasi fragmen gen protein membran sporozoit yang merupakan produk PCR dan berdasarkan hasil elektroforesis DNA menggunakan primer forward dan primer reverse spesifik menghasilkan produk PCR dengan panjang 366 bp.