KONSTRUKSI PLASMID REKOMBINAN YANG MENGEMBAN GEN PENYANDI β-1,3-GLUKANASE (pPICZαA-MKAFGlu1) DAN EKSPRESINYA DI Pichia pastoris KM71H

• Main Author: M. KHOTIBUL UMAM, 081511533035
• Format: Theses and Dissertations NonPeerReviewed
• Language: English; Indonesian; Indonesian; Indonesian; Indonesian
• Published: 2019
• Subjects: QD1-999 Chemistry; QD450-801 Physical and theoretical chemistry
• Online Access: http://repository.unair.ac.id/86634/1/MPK%2049-19%20UMA%20K_ABSTRACT.pdf; http://repository.unair.ac.id/86634/2/MPK%2049-19%20UMA%20K_ABSTRAK.pdf; http://repository.unair.ac.id/86634/3/MPK%2049-19%20UMA%20K_DAFTAR%20ISI.pdf; http://repository.unair.ac.id/86634/4/MPK%2049-19%20UMA%20K_DAFTAR%20PUSTAKA.pdf; http://repository.unair.ac.id/86634/5/MPK%2049-19%20UMA%20K.pdf; http://repository.unair.ac.id/86634/; http://lib.unair.ac.id
• Institution: Universitas Airlangga

β-1,3-glukanase adalah enzim yang memiliki peran penting dalam bidang kesehatan terutama sebagai anti biofilm. Gen MKAFGlu1 adalah gen penyandi β-1,3-glukanase yang diperoleh dari eksplorasi metagenomik kelenjar pencernaan Achatina fulica. Penelitian ini bertujuan untuk melakukan konstruksi plasmid pPICZαA-MKAFGlu1 dan mengekspresikan enzim MKAFGlu1 di Pichia pastoris KM71H. Gen MKAFGlu1 diisolasi dan diamplifikasi dari plasmid pTriplEx2-MKAFGlu1 dengan menggunakan metode PCR. Propagasi plasmid rekombinan pPICZαA-MKAFGlu1 dilakukan di dalam E. coli TOP10, dan selanjutnya ditransformasikan ke dalam P. pastoris KM71H. Transforman diekspresikan secara ekstraseluler dengan induksi metanol setiap 24 jam sekali hingga jam ke-144. Enzim dipanen setiap 24 jam untuk menguji tingkat ekspresinya. Uji aktivitas β-1,3-glukanase dilakukan dengan metode uji gula pereduksi menggunakan reagen DNS. Amplifikasi gen MKAFGlu1 dengan PCR menghasilkan pita dengan ukuran 737 bp yang merupakan ukuran gen MKAFGlu1. Transformasi plasmid yang diisolasi dari E. coli TOP10 rekombinan (pPICZαA-MKAFGlu1) ke dalam P. pastoris KM71H menghasilkan tiga koloni positif yang membawa pPICZαA-MKAFGlu1. Aktivitas β-1,3-glukanase terus meningkat, dengan aktivitas tertinggi 2,2 U / mL pada jam ke-120. Oleh karena itu, dari penelitian ini waktu panen terbaik untuk ekspresi enzim β-1,3-glukanase yang diinduksi metanol adalah pada jam ke-120, dengan aktivitas 2,2 U / mL.