OPTIMALISASI AMPLIFIKASI PCR UNTUK ISOLASI GEN FUSI cbm-lcc2 DARI pET30a REKOMBINAN

• Main Author: AISYAH PRATIWI ARIMURTI, 081511533059
• Format: Theses and Dissertations NonPeerReviewed
• Language: English; English; English; Indonesian
• Published: 2019
• Subjects: QD625-655 Radiation chemistry
• Online Access: http://repository.unair.ac.id/89542/1/MPK.%2087-19%20Ari%20o%20abstrak.pdf; http://repository.unair.ac.id/89542/2/MPK.%2087-19%20Ari%20o%20daftar%20isi.pdf; http://repository.unair.ac.id/89542/3/MPK.%2087-19%20Ari%20o%20daftar%20pustaka.pdf; http://repository.unair.ac.id/89542/4/MPK.%2087-19%20Ari%20o.pdf; http://repository.unair.ac.id/89542/; http://lib.unair.ac.id
• Institution: Universitas Airlangga

Lakase merupakan enzim yang mengkatalis degradasi lignin dengan cara oksidasi. Carbohydrate Binding Module (CBM) merupakan komponen penting dalam sisi aktif enzim yang dapat meningkatkan aktivitas enzim. Gen cbm-lcc2 telah terinsersi pada plasmid pET30a dan diekspresikan Escherichia coli BL21. Namun, masih diperlukan optimalisasi untuk ekspresinya. Penelitian ini bertujuan untuk mengoptimalisasi isolasi dan amplifikasi gen cbm-lcc2 dari pET30a dalam Escherichia coli TOP10 sebagai langkah awal proses subkloning. DNA template yang digunakan pada penelitian ini adalah pET30a-cbm-lcc2. Metode isolasi meliputi metode Polymerase Chain Reaction (PCR), pemurnian dan sekuensing. Proses PCR dilakukan menggunakan enzim Taq Polimerase dan Pfu Polimerase. PCR dilakukan sebanyak 30-35 siklus pada kondisi denaturasi 95ºC, annealing 53-63ºC dan extension 72ºC. Amplikon PCR dianalasis dengan metode sekuensing untuk mengetahui bahwa gen cbm-lcc2 yang akan diklon ke dalam pET32a telah terisolasi dan memiliki tingkat homologi 99% gen cbm-lcc2 dari pET30a.