Identifikasi Mutan-mutan Klebsiella pneumoniae yang Resisten terhadap Antibiotika BRL 41897a dengan Metoda Southern Blot: Identification of Klebsiella pneumoniae resistant mutants against brl 41897a antibiotic using sout

• Main Author: Perpustakaan UGM, i-lib
• Format: Article NonPeerReviewed
• Published: [Yogyakarta] : Universitas Gadjah Mada 2002
• Subjects: Jurnal i-lib UGM
• Online Access: https://repository.ugm.ac.id/24601/; http://i-lib.ugm.ac.id/jurnal/download.php?dataId=7579
• Institution: Universitas Gadjah Mada

Pembuatan mutan-mutan Klebsiella pneumoniae yang resisten terhadap Antibiotika BRL 41897A memakai mutagenesis dengan TnphoA telah menghasilkan tak kurang dari 30 mutan teridentifikasi. Untuk mengetahui (1) apakah mutan-mutan tersebut resisten karena adanya sisipan (insert) dari TnphoA atau bukan dan (2) berapa gena yang disisipi oleh TnphoA, maka dilakukan isolasi kromosom dari mutan-mutan dan kemudian dilakukan identifikasi dengan metoda Southern Blot dengan memakai "probe" dari fragmen TnphoA sendiri. Dan hasil analisis Southern Blot menunjukkan bahwa dari 10 mutan yang diperiksa, minimal I mutan (KSLI9) membawa satu copy TnphoA, dan minimal 2 mutan KSL38 dan KSL52 membawa 2 copy TnphoA. Hasil tersebut menunjukkan bahwa mutagenesis dengan TnphoA terbukti merupakan metoda yang efisien untuk pembuatan mutan yang mudah diseleksi, terutama mutasi gena yang mengontrol ekspresi protein membran luar dan protein periplasmik. Kata kunci : Mutan K. pneumoniae- resisten BRL41897 � TnphoA � Southern Blot. ABSTRACT Isolation of Klehsiella pneumoniae resistant mutants against BRL 4I897A antibiotics using TnphoA has yielded 30 mutants which have been characterized. In order to identify whether the mutants are as a result of the insertion (transposition) of TnphoA, and to count how many copies of TnphoA are inserted in the each mutant chromosome, several chromosomal DNA of the mutants have been cut with restriction enzymes and analised using Southern blot method and DIG conjugation. The results showed that at least one mutant (KSLI9) carried one copy of transposon, whereas at least 2 mutants (KSL38 and KSL52, ) have 2 copies. It is obvious that TnphoA mutagenesis provides an efficient method of selecting mutants which are defective in genes controlling expression of the outer membrane and the periplasmic membrane proteins. Key words: Resistant K. pneumoniae mutants- TnphoA mutagenesis BRL 41897A- Southern Blot.