KLONING, SEQUENSING DAN EKSPRESI cDNA PENYANDI PROTEIN MEMBRAN TAKIZOIT TOXOPLASMA GONDII ISOLAT LOKAL

• Main Author: , Wayan T. Artama, Wisnu Nurcahyo dan Mufasirin
• Format: Article NonPeerReviewed
• Published: [Yogyakarta] : Lembaga Penelitian UGM 2003
• Online Access: https://repository.ugm.ac.id/92824/; http://repository.ugm.ac.id/digitasi/index.php?module=cari_hasil_full&idbuku=580
• Institution: Universitas Gadjah Mada

Toxoplasmosis merupakan penyakit parasiter yang sering diasosiasikan dengan penyakit defek kongenital dan infeksi dapat mengancam keselamatan penderita, disebabkan oleh protozoa parasit yang obligat intraseluler yaitu Toxoplasma gondii. Parasit ini dapat menginfeksi berbagai jenis mamalia dan burung. Bila parasit ini menginfeksi ibu hamil terutama pada trimester I dan II dapat mengakibatkan kematian janin intra uterin atau melahirkan bayi cacat dan apabila sampai melahirkan bayi normal tetapi secara subklinis terinfeksi, maka dalam perjalanan hidupnya dapat menimbulkan gangguan fungsi serebral atau khorioretinitis. Protein membran T. gondii adalah protein yang mempunyai fungsi biologis dan bersifat imunogenik, oleh karena itu tujuan penelitian ini ditekankan pada kloning, sequensing, ekspresi dan karakterisasi gen penyandi protein tersebut untuk pengembangan diagnosis molekuler toxoplasmosis sehingga diharapkan dapat memperbaiki cara-cara diagnosis konvensional yang berbasis uji serologik. Disamping itu dapat dimanfaatkan untuk melakukan perbandingan molekuler dari isolat RH dan isolat lokal T. gondii. Selain itu protein rekombinan yang dihasilkan sangat potensial guna pengembangan sub unit vaksin, pengendalian invasi parasit ke sel, serta dalam spektrum yang lebih luas sangat bermanfaat pada pencegahan, pengendalian dan terapi toxoplasmosis. Total ribonucleic acid dan mRNA diisolasi dari takizoit yang diperbanyak secara in vivo pada mencit strain Balb/c. Messenger RNA diisolasi dari RNA total dengan menggunakan Poly A Tract mRNA isolation system (Promega) dan sintesis cDNA menggunakan Riboclone ® EcoRI adaptor ligation system (Promega), Selanjutnya disambungkan dengan lamda gt 11 DNA yang telah di defosforilasi. Lamda gt II yang telah disambung dengan cDNA selanjutnya dikemas (packaging) dan ditransveksi ke Escherichia coli Y 1090. Plaques rekombinan yang di dapat di analisis dengan teknik imunobloting menggunakan monoklonal/poliklonal antibodi terhadap protein T. gondii. Transveksi dari lamda rekombinan pada E.coli Y 1090 didapatkan plaques yang secara imunobloting menunjukkan adanya lamda rekombinan yang mengekspresikan protein T gondii. Kloning cDNA pada plasmid Mal p2 didapatkan 3 klone yang dapat mengekspresikan protein rekombinan, sedangkan cloning cDNA pada pUCI8 didapatkan 7 klon rekombinan yang menunjukkan adanya over ekspresi setelah distimulasi dengan IPTG. Konfirmasi lebih lanjut apakah protein protein tersebut adalah protein membran perlu dilakukan uji imunobloting menggunakan monoclonal antibodi spesifik terhadap membran dan penentuan sekuens DNA. Kata kunci: Takizoit, eDNA, protein rekombinan, imunobloting