Nghiên cứu biểu hiện và tinh chế α-glucuronidase có nguồn gốc vi khuẩn dạ cỏ dê trong tế bào Esc cherichia coli

• Main Authors: Lê, Ngọc Giang, Lê, Tùng Lâm, Trần, Thị Loan, Đỗ, Thị Huyền, Trương, Nam Hải
• Format: Article
• Language: Vietnamese
• Published: H. : ĐHQGHN 2018
• Subjects: α-glucuronidase; Biểu hiện gen; Escherichia coli; DNA metagenome; Gglc1
• Online Access: http://repository.vnu.edu.vn/handle/VNU_123/62796
• Institution: Vietnam National University, Hanoi

Nghiên cứu biểu hiện và tinh chế α-glucuronidase có nguồn gốc vi khuẩn dạ cỏ dê trong tế bào Esc cherichia coliα-1,2-Glucuronidase GH67 là enzyme có khả năng phân cắt chuỗi bên 4-O-methylglucuronic acid ((Me)GlcA) trong glucuronoarabinoxylan để làm tăng chuyển hóa lignocellulose thành đường đơn cho lên men sản xuất cồn và các chất có giá trị từ sinh khối thực vật. Trong nghiên cứu này, gen Gglc1 dài 1908 nucleotide mã hóa cho enzyme α-1,2-glucuronidase GH67 trưởng thành có nguồn gốc từ vi khuẩn trong dạ cỏ dê đã được biểu hiện thành công trong chủng E. coli Roseta. Hầu hết enzyme được biểu hiện dưới dạng tan khi chủng tái tổ hợp được nuôi cấy trong môi trường TB, PE có 0,05 mM IPTG ở 25oC, 30oC. Enzym được tinh chế thành công bằng sắc ký ái lực với độ tinh sạch 90%. Hoạt tính của enzyme đã được đánh giá sơ bộ dựa trên sự chuyển hóa (Me)GlcA trong birchwood xylan thành 4-O-methyl-D-glucuronic acid và D-glucuronic acid làm thay đổi pH dung dịch và được phát hiện bằng bromothymol blue. Enzyme sẽ được tiếp tục đánh giá tính chất để xem xét khả năng bổ sung vào hỗn hợp enzyme cho chuyển hóa hiệu quả sinh khối thực vật thành đường.