การหาลักษณะจำเพาะของยีนเซลลูเลสและไซลาเนสจากแบคทีเรียในกระเพาะหมักของวัว

In this research, cellulase and xylanase producing bacteria were isolated from cow’s rumen fluid. Among twenty isolates, strain B4 showed the highest cellulolytic and hemicellulolytic activity. Analysis of a 16S rDNA sequence showed the highest homology with Bacillus subtilis (>99%). The isolate,...

Full description

Saved in:
Bibliographic Details
Main Author: รัชรา กาละวงค์
Other Authors: รศ. ดร. ชโลบล วงศ์สวัสดิ์
Format: Theses and Dissertations
Language:Thai
Published: เชียงใหม่ : บัณฑิตวิทยาลัย มหาวิทยาลัยเชียงใหม่ 2020
Online Access:http://cmuir.cmu.ac.th/jspui/handle/6653943832/69215
Tags: Add Tag
No Tags, Be the first to tag this record!
Institution: Chiang Mai University
Language: Thai
id th-cmuir.6653943832-69215
record_format dspace
spelling th-cmuir.6653943832-692152020-07-31T00:50:20Z การหาลักษณะจำเพาะของยีนเซลลูเลสและไซลาเนสจากแบคทีเรียในกระเพาะหมักของวัว Characterization of Cellulase and Xylanase Genes from Cow’s Rumen Bacteria รัชรา กาละวงค์ รศ. ดร. ชโลบล วงศ์สวัสดิ์ รศ.ดร.สมบูรณ์ อนันตลาโภชัย In this research, cellulase and xylanase producing bacteria were isolated from cow’s rumen fluid. Among twenty isolates, strain B4 showed the highest cellulolytic and hemicellulolytic activity. Analysis of a 16S rDNA sequence showed the highest homology with Bacillus subtilis (>99%). The isolate, strain B4 was designated as B. subtilis B4. Then both of the cellulase (BglC) and xylanase (XynA) genes of B. subtilis B4 were cloned into expression vector (pETDuet-1) and transformed into E. coli strain BL21 (DE3). The transformants named pETbglC and pETxynA showed cellulase and xylanase specific activity of 19.46 and 110.38 U/mg protein, respectively and about 3-fold of cellulase and 2-fold of xylanase grater than enzymes of the wild type. The cellulase and xylanse which produced by pETbglC and pETxynA were purified by ammonium sulfate precipitation, DEAD Toyopearl 650M and Butyl-Toyopearl 650M column. The molecular mass of purified cellulase and xylanase were estimated to be approximately 50 and 23 kDa on SDS-PAGE, respectively. The cellulase exhibited its optimum activity at 60 °C and pH 8.0. It was stable over a broad range at 20-80 °C and pH 5-10. Optimal temperature and pH of xylanase activity were 50 °C and pH 7.0. The enzyme showed stability at 20-50 °C and pH 4-9. Moreover, enzyme activity of both enzymes was stimulated by Fe3+ and was strongly inhibited by Mn2+ and Cu2+. Furthermore, cellulase and xylanase in this study have potential to be used for degradation of non-treated and pretreated lignocellulosic substates (corn stover, rice straw, paragrass and napier grass). Therefore, these enzymes could be useful in hydrolysis of lignocellulosic biomass into reducing sugar, which is finally able to ferment to ethanol. 2020-07-31T00:50:20Z 2020-07-31T00:50:20Z 2015-05 Thesis http://cmuir.cmu.ac.th/jspui/handle/6653943832/69215 th เชียงใหม่ : บัณฑิตวิทยาลัย มหาวิทยาลัยเชียงใหม่
institution Chiang Mai University
building Chiang Mai University Library
continent Asia
country Thailand
Thailand
content_provider Chiang Mai University Library
collection CMU Intellectual Repository
language Thai
description In this research, cellulase and xylanase producing bacteria were isolated from cow’s rumen fluid. Among twenty isolates, strain B4 showed the highest cellulolytic and hemicellulolytic activity. Analysis of a 16S rDNA sequence showed the highest homology with Bacillus subtilis (>99%). The isolate, strain B4 was designated as B. subtilis B4. Then both of the cellulase (BglC) and xylanase (XynA) genes of B. subtilis B4 were cloned into expression vector (pETDuet-1) and transformed into E. coli strain BL21 (DE3). The transformants named pETbglC and pETxynA showed cellulase and xylanase specific activity of 19.46 and 110.38 U/mg protein, respectively and about 3-fold of cellulase and 2-fold of xylanase grater than enzymes of the wild type. The cellulase and xylanse which produced by pETbglC and pETxynA were purified by ammonium sulfate precipitation, DEAD Toyopearl 650M and Butyl-Toyopearl 650M column. The molecular mass of purified cellulase and xylanase were estimated to be approximately 50 and 23 kDa on SDS-PAGE, respectively. The cellulase exhibited its optimum activity at 60 °C and pH 8.0. It was stable over a broad range at 20-80 °C and pH 5-10. Optimal temperature and pH of xylanase activity were 50 °C and pH 7.0. The enzyme showed stability at 20-50 °C and pH 4-9. Moreover, enzyme activity of both enzymes was stimulated by Fe3+ and was strongly inhibited by Mn2+ and Cu2+. Furthermore, cellulase and xylanase in this study have potential to be used for degradation of non-treated and pretreated lignocellulosic substates (corn stover, rice straw, paragrass and napier grass). Therefore, these enzymes could be useful in hydrolysis of lignocellulosic biomass into reducing sugar, which is finally able to ferment to ethanol.
author2 รศ. ดร. ชโลบล วงศ์สวัสดิ์
author_facet รศ. ดร. ชโลบล วงศ์สวัสดิ์
รัชรา กาละวงค์
format Theses and Dissertations
author รัชรา กาละวงค์
spellingShingle รัชรา กาละวงค์
การหาลักษณะจำเพาะของยีนเซลลูเลสและไซลาเนสจากแบคทีเรียในกระเพาะหมักของวัว
author_sort รัชรา กาละวงค์
title การหาลักษณะจำเพาะของยีนเซลลูเลสและไซลาเนสจากแบคทีเรียในกระเพาะหมักของวัว
title_short การหาลักษณะจำเพาะของยีนเซลลูเลสและไซลาเนสจากแบคทีเรียในกระเพาะหมักของวัว
title_full การหาลักษณะจำเพาะของยีนเซลลูเลสและไซลาเนสจากแบคทีเรียในกระเพาะหมักของวัว
title_fullStr การหาลักษณะจำเพาะของยีนเซลลูเลสและไซลาเนสจากแบคทีเรียในกระเพาะหมักของวัว
title_full_unstemmed การหาลักษณะจำเพาะของยีนเซลลูเลสและไซลาเนสจากแบคทีเรียในกระเพาะหมักของวัว
title_sort การหาลักษณะจำเพาะของยีนเซลลูเลสและไซลาเนสจากแบคทีเรียในกระเพาะหมักของวัว
publisher เชียงใหม่ : บัณฑิตวิทยาลัย มหาวิทยาลัยเชียงใหม่
publishDate 2020
url http://cmuir.cmu.ac.th/jspui/handle/6653943832/69215
_version_ 1681752617579970560