การหาภาวะที่เหมาะสมในการผลิตนิวทรัลโปรติเอสทนร้อนจาก Bacillus cereus และลักษณะสมบัติของเอนไซม์ที่บริสุทธิ์บางส่วน

วิทยานิพนธ์ (วท.ม.)--จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย, 2546

Saved in:

Bibliographic Details
Main Author:	อภิรดี อุดมสิน, 2517-
Other Authors:	นภา ศิวรังสรรค์
Format:	Theses and Dissertations
Language:	Thai
Published:	จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย 2007
Subjects:	เอนไซม์ > การผลิต โปรติเอส แบคทีเรีย
Online Access:	http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/3384
Tags:	Add Tag No Tags, Be the first to tag this record!
Institution:	Chulalongkorn University
Language:	Thai

id	th-cuir.3384
record_format	dspace
spelling	th-cuir.33842008-02-08T06:03:16Z การหาภาวะที่เหมาะสมในการผลิตนิวทรัลโปรติเอสทนร้อนจาก Bacillus cereus และลักษณะสมบัติของเอนไซม์ที่บริสุทธิ์บางส่วน Optimization for the production of thermoresistant neutral protease from Bacillus cereus and characterization of partially purified enzyme อภิรดี อุดมสิน, 2517- นภา ศิวรังสรรค์ จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย. คณะวิทยาศาสตร์ เอนไซม์--การผลิต โปรติเอส แบคทีเรีย วิทยานิพนธ์ (วท.ม.)--จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย, 2546 Bacillus cereus เป็นแบคทีเรียที่ผลิตโปรติเอสทนร้อน ที่แยกได้จากดินบริเวณบ่อน้ำร้อนในประเทศไทย แบคทีเรียที่ถูกคัดเลือกชนิดนี้ถูกจำแนกสายพันธุ์ โดยใช้ลักษณะทางชีวเคมีและยืนยันผลด้วยวิธี 16S rRNA gene จากการทดลองพบว่า ภาวะที่ดีที่สุดคือการใช้ Raja's medium ซึ่งมีสูตรอาหารดังนี้ CaCl2.2H2O 0.1 กรัม, K2HPO4 0.06 กรัม MgSO4. 7H2O 0.05 กรัม, NaCl 0.045 กรัม และ Peptone 0.5 กรัม %(w/v) ที่อุณหภูมิ 37 ํC, pH 7.0, ปริมาณเชื้อเริ่มต้นที่เหมาะสมคือ 0.5% (v/v) ซึ่งมีส่วนประกอบในอาหารคือ 0 กรัม %glucose (w/v), 0.5 กรัม %peptone (w/v) ภายใต้การเลี้ยงในขวดเขย่าขนาด 1 ลิตรซึ่งมีอาหารเลี้ยงเชื้อปริมาตร 300 มล. โดยใช้ความเร็วรอบในการเขย่าที่ 200 รอบต่อนาที และภาวะที่ดีที่สุดในการหาแอคติวิตีของโปรติเอส โดยใช้ azocasein คือที่อุณหภูมิ 55 ํC, pH 7.0 ภายหลังการเลี้ยงเชื้อเป็นเวลา 48 ชั่วโมง สามารถผลิตเอนไซม์ซึ่งมีค่าแอคติวิตีสูงที่สุดเท่ากับ 5.69 หน่วยต่อมก. โปรตีน จากการหาน้ำหนักโมเลกุลของเอนไซม์โดยวิธีเซฟาเดกซ์ จี-75 คอลัมน์โครมาโตรกราฟี พบว่ามีน้ำหนักโมเลกุล 34,700 ดาลตัน ส่วนการหาหน่วยย่อยของเอนไซม์ด้วยวิธี Substrate-Containing SDS Zymogram gel พบว่ามีน้ำหนักโมเลกุล 44,700 ดาลตัน แคลเซียมอิออนสามารถเร่งการทำงานของ crude enzyme ได้และสารที่ยับยั้งการทำงานของเอนไซม์คือ EDTA นิวทรัลโปรติเอสที่ผลิตจาก B. cereus สามารถย่อยสับสเตรททั้ง casein หรือ azocasein ได้ดีกว่านิวทรัล โปรติเอสที่ผลิตจาก B.subtilis TISTR 25 Bacillus cereus was isolated as a mesophilic bacteria which produced thermoresistant protease among 63 soil samples. The isolated bacteria was selected and identified by using biochemical characterization. And the test was confirmed with 16S rRNA gene. It was found that the best conditions were used Raja's medium (CaCl2.2H2O 0.1 g, K2HPO4 0.06 g, MgSO4.7H2O 0.05 g, NaCl 0.045 g, peptone 0.5 g% (w/v)) at 370 ํC, pH 7.0, 0.5% (v/v) initial inoculum size, 0% (w/v) glucose in shaking flask culture 1,000 ml and were shaked with the speed of 200 rpm. The protease was exhibited maximum activity towards azocasein at 550 ํC, pH 7.0 and the enzyme production was reached its maximum level of 5.69 U/mg protein after 48 hours. The protease had an apparent molecular weight of 34,700 Dalton by Sephadex G-75 gel - filtration chromatography. And the protease had molecular weight of 44,700 Dalton by Substrate-Containing SDS Zymogram gel. The activity, crude enzyme, was considerably increased by addition of Ca2+. Enzyme activity was inhibited by EDTA. The data clearly indicated that protease from Bacillus cereus was likely neutral protease. Neutral protease from B.cereus that could hydrolyse substrate , casein or azocasein, better than the protease from B.subtilis TISTR25 2007-02-13T09:49:05Z 2007-02-13T09:49:05Z 2546 Thesis 9741737327 http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/3384 th จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย 4392796 bytes application/pdf application/pdf จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย
institution	Chulalongkorn University
building	Chulalongkorn University Library
country	Thailand
collection	Chulalongkorn University Intellectual Repository
language	Thai
topic	เอนไซม์--การผลิต โปรติเอส แบคทีเรีย
spellingShingle	เอนไซม์--การผลิต โปรติเอส แบคทีเรีย อภิรดี อุดมสิน, 2517- การหาภาวะที่เหมาะสมในการผลิตนิวทรัลโปรติเอสทนร้อนจาก Bacillus cereus และลักษณะสมบัติของเอนไซม์ที่บริสุทธิ์บางส่วน
description	วิทยานิพนธ์ (วท.ม.)--จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย, 2546
author2	นภา ศิวรังสรรค์
author_facet	นภา ศิวรังสรรค์ อภิรดี อุดมสิน, 2517-
format	Theses and Dissertations
author	อภิรดี อุดมสิน, 2517-
author_sort	อภิรดี อุดมสิน, 2517-
title	การหาภาวะที่เหมาะสมในการผลิตนิวทรัลโปรติเอสทนร้อนจาก Bacillus cereus และลักษณะสมบัติของเอนไซม์ที่บริสุทธิ์บางส่วน
title_short	การหาภาวะที่เหมาะสมในการผลิตนิวทรัลโปรติเอสทนร้อนจาก Bacillus cereus และลักษณะสมบัติของเอนไซม์ที่บริสุทธิ์บางส่วน
title_full	การหาภาวะที่เหมาะสมในการผลิตนิวทรัลโปรติเอสทนร้อนจาก Bacillus cereus และลักษณะสมบัติของเอนไซม์ที่บริสุทธิ์บางส่วน
title_fullStr	การหาภาวะที่เหมาะสมในการผลิตนิวทรัลโปรติเอสทนร้อนจาก Bacillus cereus และลักษณะสมบัติของเอนไซม์ที่บริสุทธิ์บางส่วน
title_full_unstemmed	การหาภาวะที่เหมาะสมในการผลิตนิวทรัลโปรติเอสทนร้อนจาก Bacillus cereus และลักษณะสมบัติของเอนไซม์ที่บริสุทธิ์บางส่วน
title_sort	การหาภาวะที่เหมาะสมในการผลิตนิวทรัลโปรติเอสทนร้อนจาก bacillus cereus และลักษณะสมบัติของเอนไซม์ที่บริสุทธิ์บางส่วน
publisher	จุฬาลงกรณ์มหาวิทยาลัย
publishDate	2007
url	http://cuir.car.chula.ac.th/handle/123456789/3384
_version_	1681412765133045760

Similar Items