โคลนจีนที่สร้างโพลีไฮดรอกซีอัลคาโนเอท (PHA) ของ Rhodopseudomonas palustris สายพันธุ์ NCIB8288 เข้าไปยัง Escherichia coli

• Main Author: สมพร ตั๊นสกุล
• Other Authors: Faculty of Science (Molecular Biotechnology and Bioinformatics)
• Format: Technical Report
• Language: Thai
• Published: มหาวิทยาลัยสงขลานครินทร์ 2013
• Subjects: การโคลนยีน; โพลีไฮดรอกซีอัลคาโนเอท; เอสเคอริเคียโคไล
• Online Access: http://kb.psu.ac.th/psukb/handle/2010/8938; https://tnrr.nriis.go.th/#/services/research-report/detail/254697
• Institution: Prince of Songkhla University

จากการทดลองการหาสภาวะที่เหมาะสมในการสกัด PHA synthase ออกจากเซลล์ พบว่าสภาวะที่เหมาะสมในการสกัดเอนไซม์ PHA synthase จากเซลล์ คือการทำให้เซลล์แตกด้วย sonicator โดยใช้ช่วงเวลา 5 นาที โดยให้หยุดทุก ๆ 15 วินาที เป็นเวลา 5 วินาที ค่ากิจกรรมของ PHA synthase ในสารละลายเอนไซม์ที่สกัดได้จาก Rhodopseudomonas palustris NCIB8288 หรือ CH72 มีค่าเท่ากับ 24.57 units/ml การเพิ่มจำนวน PHA หsynthase gene ด้วยวิธี PCR โดยทำการออกแบบไพรเมอร์ที่มีความจำเพาะกับ PHA synthase gene โดยทำการเลือกบริเวณที่ conserve จาก PHA synthase gene (class I) ในแบคทีเรียกลุ่ม Rhodopseudomonas palustris ที่สายพันธุ์ใกล้เคียงกัน พบว่าไพรเมอร์ที่ออกแบบสามารถจับกับ chromosomal DNA ของ Rhodopseudomonas palustris CH72 เป็น template ได้โดยมีขนาดประมาณ 538 bp ซึ่งมีขนาดตรงกับ PCR product ของไพรเมอร์ที่ออกแบบไว้ แต่อย่างไรก็ตาม การหาลำดับนิวคลีโอไทด์ของยีน ตลอดจนการทำ ligation และ transformation ยังไม่สามารถได้ E. coli JM109 ที่มี PHA synthase gene ดังกล่าว