Tách dòng và đồng biểu hiện gen mã hóa hai loại kháng nguyên vỏ GP5ecto (vùng ngoại bào) và M của virus gây hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn

• Main Authors: Nguyễn, Thị Minh Hằng, Hồ, Thị Thương, Nguyễn, Thu Giang, Phạm, Bích Ngọc, Nguyễn, Trung Nam, Chu, Hoàng Hà
• Format: Article
• Language: Vietnamese
• Published: Đại học Quốc gia Hà Nội 2017
• Subjects: Biểu hiện tạm thời; Đồng biểu hiện; Protein GP5ectodomain-M; PRRSV; Tinh sạch protein
• Online Access: http://repository.vnu.edu.vn/handle/VNU_123/60748; https://doi.org/10.25073/2588-1140/vnunst.4588
• Institution: Vietnam National University, Hanoi

Hội chứng rối loạn sinh sản và hô hấp ở lợn (Porcine reproductive and respiratory syndrome - PRRS) là một loại bệnh truyền nhiễm phổ biến trong chăn nuôi lợn, do virus PRRS (PRSSV) gây ra. Protein GP5 (ORF5) là glycoprotein vỏ ngoài, bao gồm vùng ngoại bào (ectodomain) và vùng nội bào (endodomain). Protein M (ORF6) là protein cấu trúc bảo thủ nhất của virus và không bị glycosyl hóa. Protein GP5 và M liên kết chặt chẽ với nhau bằng cầu disulfit giúp cho việc lắp ráp và lây nhiễm của virus. Sự biểu hiện đồng thời của protein GP5 và M có thể phát triển phản ứng miễn dịch mạnh hơn. Trong nghiên cứu này, hai đoạn gen mã hóa cho protein GP5ecto (vùng ngoại bào) và M của chủng virus PRRS (VN07196) được khuếch đại riêng lẻ. Hai đoạn gen này sau đó được ghép nối với nhau bằng kỹ thuật PCR lồng sử dụng các căp mồi đặc hiệu; được gắn kết với promoter 35S, Histag và Cmyc, ELP; nhân dòng trong vector pRTRA và thiết kế vào cấu trúc vetor chuyển gen thực vật pCB301. Protein tái tổ hợp GP5ecto-M gắn kết ELP được biểu hiện thành công trong lá cây thuốc lá N. benthamiana bằng công nghệ biểu hiện gen tạm thời, tối ưu và tinh sạch protein GP5ecto-M bằng phương pháp mITC cho thấy đã tinh sạch thành công loại protein này. Đây là cơ sở khoa học quan trọng để tiến hành biểu hiện tạm thời và tinh sạch kháng nguyên GP5ecto-M ở quy mô lớn nhằm mục đích nghiên cứu tính sinh miễn dịch trên động vật và sản xuất vaccine tiểu đơn vị phòng chống PRRSV.